Peroxiredoxinok a parazitákban


Parazita biológia Absztrakt A redox-egyensúly elengedhetetlen a maláriaparaziták túléléséhez, növekedéséhez és szaporodásához, és az oxidatív stressz számos maláriaellenes gyógyszer hatásmechanizmusában vesz részt.

Nem tudom nemmegemlíteni, hogy mennyire szörnyen érzem magam már akkor, ha már elkap csak az influenza. Mennyivel rosszab lehet a kínszenvedés, amely naponta újra visszatér, mert ez a helyzet a maláriánál.

A hidrogén-peroxid H 2 O 2 fontos szerepet játszik a redox-jelzés és a patogén-gazdasejt kölcsönhatásokban. Az intra- és szubcelluláris redox események megfigyeléséhez rendkívül érzékeny és specifikus szondák szükségesek.

Mindkét rekeszben a szenzor reprodukálható érzékenységet mutatott az alacsony mikromoláris tartományban és a maláriaellenes vegyületek felé farmakológiai szempontból releváns koncentrációkban. Rövid idejű 4 óra expozíció esetén az artemisinin-származékok, a kinin és a mefloquine a mitokondriumok H 2 O 2 -szintjét befolyásolta, míg peroxiredoxinok a parazitákban klórkvin peroxiredoxinok a parazitákban egy glükózfoszfát-dehidrogenáz G6PD inhibitor befolyásolta a citoszolt; Az aril-metil-amino-szteroidok és a G6PD inhibitorok 24 órás expozíciója a mitokondriumok és a citoszol oxidációját tárta fel.

Bevezetés A malária elleni erőteljes globális erőfeszítések ellenére a hatékony és megfizethető maláriaellenes szerekkel szembeni paraziták elterjedése, beleértve a klorokint CQ is, rontotta a helyzetet peroxiredoxinok a parazitákban az 1. Ezért a multirezisztens parazitákkal szemben ellenálló új, maláriaellenes szerek kifejlesztése lásd a 3.

Az új kábítószer-felfedezés egyik útja az, hogy kihasználja a parazita fogékonyságát a redox-egyensúly egyensúlyában 4. Az elektronátviteli láncból származó oxidánsok belső termelése is előfordulhat 7. Ezen túlmenően a hemoglobin peroxiredoxinok a parazitákban savas emésztőrendszerben DV a H 2 O 2, a sejtekben a legfontosabb reaktív oxigénfajok ROS létrehozásához vezet.

Hosszúnak tekinthető toxikus mellékterméknek, amely károsíthatja a makromolekulákat, beleértve a DNS-t, a fehérjéket és a lipideket 9, és a H 2 O 2- t egyre inkább fontos es, es szabályozó funkciós molekulával ismeri fel.

A H 2 O 2 szelektíven oxidálja a reaktív ciszteinmaradványokat és ezáltal szabályozza a redox-érzékeny fehérjék 12, 13 funkcióit. Peroxiredoxinok a parazitákban a maláriaparazitáknak nincs igazi kataláz és glutation-peroxidáz 16, amely támogatja azt a gondolatot, hogy a P. Számos maláriaellenes gyógyszer hatására legalább részben oxidatív stressz keletkezik 17, 18, 19, Ugyanakkor kevéssé ismert a parazita specifikus molekuláris célpontjairól, amelyek az oxidatív kihívásra érzékenyek.

A közelmúltban áttekintették a maláriaparaziták és a tripanoszomok redoxváltozásának kimutatására szolgáló jelenlegi módszereket, például a biokémiai vizsgálatokat és a fluoreszcens festékeket peroxiredoxinok a parazitákban A komoly hátrányok és az artefaktumok kockázatai mellett azonban a mai napig alkalmazott megközelítések egyike sem alkalmazható a ROS kifejlesztésére a tenyésztett maláriaparaziták szubcelluláris részében.

MTA DOKTORI ÉRTEKEZÉS NADPH-OXIDÁZ ÉS PEROXIDÁZ ENZIMEK VIZSGÁLATA EMLŐS SEJTEKBEN GEISZT MIKLÓS

Mindkét szenzor szelektívnek és érzékenynek bizonyult a H 2 O 2 22 szubmikromoláris koncentrációinak kimutatására. Azonban peroxiredoxinok a parazitákban roGFP2-Orp1 érzékelő alkalmasabb volt a komplex vizsgálatokhoz a Plasmodiumban, mivel szükség van egy párhuzamos pH-szonda használatára a HyPer-3 kihívást és időigényesebb felhasználásával.

A szonda H 2 O 2 által kiváltott konformációs változásait konfokális lézeres szkennelési mikroszkópiával CLSM detektálhatjuk és nm-es gerjesztés után, nm-en as emisszióval.

A H 2 O 2 -nak való kitettség az oxidációhoz vezet a Hről Orp1-en keresztül a roGFP2-re, ami a szonda szinte sztöchiometrikus oxidációját eredményezi.

Amikor a roGFP2 oxidálódik, a gerjesztési csúcs nm-en növekszik, míg a nm-es peroxiredoxinok a parazitákban csökken.

MMS mechaniznusa biocid hatása a klór-dioxidnak- MMS

Az érzékelőt a citoszolra, és először a maláriaparaziták, a mitokondriumok szubcelluláris rekeszére irányítottuk, az attB × attP integratív rekombinációs rendszer alkalmazásával. A mycobacteriophage Bxb1 szerin integráz a helyspecifikus rekombinációt közvetíti a pDC2 expressziós plazmid fág attP helye és a P. Az érzékelő stabil integrációja csökkenti a heterogén fluoreszcencia jeleket, amelyek az epizomális expressziós rendszerekben keletkezhetnek Az integrált riportersor segítségével a CLSM segítségével szisztematikusan elemezhetjük az oxidatív és farmakológiai stressz hatásait a P.

Az alábbiakban bemutatott eredmények azt peroxiredoxinok a parazitákban, hogy a stabilan integrált roGFP2-Orp1 érzékelő robusztus eszközt biztosít a P. A parazitákat a tenyészetben három héttel a stabil transzfekció után detektáltuk.

A próbák jelenlétét a transzfektált P. A szonda mitokondriális lokalizációját a MitoTracker Orange használatával igazoltuk. A magot Hoechst mal festettük 1a. Az episzomálisan transzfektált P. A parazita életképességét nem befolyásolta negatívan a citoszol vagy a mitokondriális szenzor az azonos generációs idő és morfológia alapján.

  • Hatékonyság magyarázata MMS | MMS cseppek
  • doktori témaösszefoglalók - Környezettudományi Doktori Iskola
  • Genom fejlődés Absztrakt Számos kiváló minőségű genom áll rendelkezésre a TrypanosomaLeishmania és Phytomonas nemzetségek két gazdaszervezet trippanosomatid fajtáihozde csak töredékes információ áll rendelkezésre a monoxen single-host trippanosomatidok esetében.

A szülői NF attB vonal 6—7 szorzási arányt mutatott, az érzékelő célzott parazitái 5—6 szorzási sebességgel rendelkeztek. A próbákat 10 mM ditiotreitollal DTT állítottuk be a teljesen redukált vagy 1 mM diamiddal DIA a teljesen oxidált állapotba mindegyik 2 perc inkubációval.

A két szenzor funkcionalitásának jobb összehasonlítása érdekében a kapott időértékek arányértékeit az első alapérték-értékre normalizáltuk, amely ra lett állítva.

hashajtó férgek kezelése után

A konfokális lézer letapogató mikroszkópiával CLSM megállapítottuk, hogy mindkét próba csak a paraziták citoszoljában roGFP2-Orp1 vagy mitokondriumban Mito-roGFP2-Orp1 volt jelen, ezáltal megerősítve ezeknek a szondáknak a sikeres szelektálását specifikus szubcelluláris rekeszekhez. Ábramíg a citoszol szondát lassabban, de majdnem kétszer oxidáltuk sok 2a.

A roGFP2-Orp1-et expresszáló parazitákat maximálisan oxidáltuk legfeljebb 2, 5-szeresére µM és µM Hvel, és a fluoreszcencia arány 1, 8-szoros növekedése kimutatható a mitokondriális szenzor esetében.

A kezeletlen paraziták kontrollként szolgáltak.

Míg a monenzint széles körben alkalmazzák az állatokban, a toxicitás gátolja annak alkalmazását emberben. Mindazonáltal, a hatásmechanizmusának megértése révén a hatóanyag kifejlesztése során kihasználható parazita sérülékeny aspektusait tárja fel. Korábban megállapítottuk, hogy a monenzin a Toxoplasmát indukálja a sejtciklus leállítása és az autofágia-szerű sejthalál. Érdekes, hogy ezek a hatások függenek a mitokondrium-lokalizált TgMSH-1 fehérjétől, ami arra utal, hogy a monenzin megzavarja a mitokondriális funkciót. Bemutatjuk, hogy a monenzin kezelés csökkent mitokondriális membránpotenciálhoz és megváltozott morfológiához vezet.

Minden H 2 O 2 -koncentrációra vonatkozóan legalább kilenc trophozoit adatot vizsgáltunk három független kísérletben, adatpontonként. A három kísérlet eszközeinek SEM eszközeit és standard hibáit mutatjuk be.

A videó első 10 másodpercében a paraziták bazális redox állapotát jelző idősor első képkocka állandó képe látható.

enterobiosis laboratóriumi diagnózis

A malária elleni gyógyszerek és a rekombináns roGFP2-Orp1 közötti közvetlen kölcsönhatás meghatározása in vitro A roGFP2-Orp1 redox szenzorral végzett in vitro méréseket úgy végeztük, hogy megkülönböztessük a malária elleni gyógyszerek farmakológiai hatásait és peroxiredoxinok a parazitákban szondával való közvetlen kölcsönhatásokat.

Ezenkívül két új antimalariális ólomvegyület, nevezetesen az arilmetil-amino-szteroid 1o 26 peroxiredoxinok a parazitákban a G6PD inhibitor ML 27 hatását vizsgáltuk.

Az összes vegyületet 10 nM és 1 mM közötti koncentrációban alkalmazzuk a standard reakciópufferben. Az S1. Amint az látható, a vizsgált vegyületek nem hatottak a fluoreszcencia arányra még a legmagasabb vizsgált koncentrációkban sem.

A vizsgálatban alkalmazott maximális koncentrációk az alacsonyabb mikromoláris tartományban voltak. Amint az a 3. A CLSM adatokat legalább trophozoit értékből állítottuk össze kísérletenként.

Az átlagértékeket és az átlagértékeket ± SEM három független kísérletben mutatjuk be. A kontroll vizsgálatok kizárták a kiválasztott gyógyszerek közvetlen kölcsönhatását a H 2 O 2 próbákkal. Az ezekben a kísérletekben használt koncentrációk az S3 kiegészítő táblázatban találhatók. Az egyes paraziták bazális fluoreszcencia-arányainak ingadozása miatt a kapott arány értékeket a ra beállított kontrollértékre normalizáltuk.

gyermekek férgek kezelésére és megelőzésére

A mágneses dúsítás előtt a ciszteineket 2 mM NEM-vel blokkoltuk. Érdekes módon az ATM-sel 24 órás inkubálás vezetett a Mito-roGFP2-Orp1 érzékelő részleges citoszolikus fluoreszcencia peroxiredoxinok a parazitákban mind a nm-es, mind a nm-es csatornákban. A CLSM-adatokat trophozoitából kaptuk minden kísérlethez és minden inkubációs időhöz. A kontroll vizsgálatok kizárták a kiválasztott gyógyszerek közvetlen kölcsönhatását a tisztított H 2 O 2 próbákkal.

doktori témaösszefoglalók - Környezettudományi Doktori Iskola ...

peroxiredoxinok a parazitákban A reakciókat ezután 2 mM NEM-vel blokkoltuk. A kísérletekhez használt koncentrációk az S3 kiegészítő táblázatban találhatók. A dúsítás előtt a ciszteineket 2 mM NEM-vel blokkoltuk. A CLSM-adatokat trophozoitból állítottuk össze, minden egyes inkubációra kísérletenként.

Teljes méretű kép Vita A H 2 O 2 kulcsszerepet játszik a számos sejtfunkciót szabályozó jelátviteli kaszkádokban. A genetikailag kódolt fluoreszcens szondák egyedülálló eszközök a H 2 O 2 termelésének vizsgálata különböző méretű és összetett élő sejtekben. Ezek az érzékelők nagy specifitást, reverzibilitást, szubcelluláris célzást és transzgénikus opciókat kínálnak a natív környezetben a sejtek és szövetek károsítása nélkül.

A kapott eredmények arra utalnak, hogy egyes maláriaellenes gyógyszerek és néhány új maláriaellenes vegyület hatásmechanizmusa magában foglalja a H 2 O 2 homeosztázis zavarását a maláriaparazitán belül. Korábbi tanulmányunk szerint, a P. A fototoxicitás az élősejtek képalkotásának egyik fő problémája, amely fluoreszcensen jelölt sejtek megvilágításakor jelentkezik Ez 30 és ROS peroxiredoxinok a parazitákban szabad gyökök termeléséhez vezet, amelyek károsítják a sejteket.

Összességében mindkét érzékelő sajátos módon Bacterfort negatív vélemények különböző H 2 O 2 koncentrációkra 2a. A nagyfelbontású videó kiegészítő videó S1 először mutatja be a roGFP2-Orp1 érzékelő szivárgási jelenségét a gazdasejtbe µM H 2 O 2 hozzáadása után.

A roGFP2-Orp1 szenzornak a mitokondriumba történő irányítása lehetővé teszi a dinamikus redox változások mérését az élő Plasmodium parazitákban a H 2 O 2 által kiváltott diszkrét szubcelluláris rekeszekben, miközben megőrzi a sejt integritását.

Ez előnyt jelent más jelenleg elérhető képalkotó szerekkel szemben, mint amilyen az Amplex Red 32 vagy a CM-H 2 DCFDA 33, amelyek hajlamosak az artefaktumokra, és kizárják a H 2 O 2 dinamika rekeszspecifikus monitorozását lásd a Ezeknek a gyógyszereknek a hosszabb 24 órás inkubációja az arány növekedéséhez vezetett, de ezek nem értek el jelentőséget.

fereghajto csepp

Az ART és annak származékai maláriaellenes hatását az endoperoxid rész közvetíti, amely kölcsönhatásba lép a hemoglobin lebomlásából származó, csökkent radikálódással, ami radikális képződéshez vezet. A generált radikálisok károsítják a parazita sejtes makromolekulákat, beleértve a fehérjéket és a lipideket 35, Az ART antiparazitás hatásáért elsősorban a hatásmechanizmusa még mindig nem teljesen tisztázott a sejtben lévő számos molekuláris célpont miatt, pl.